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Defensa de tesis doctoral de la Unidad de Innovación Biomédica del CIEMAT
Finalmente, se estudió el papel de los genes remodeladores de la cromatina G9a y EZH2 en células de CV, generándose líneas carentes de estos genes mediante el uso del sistema CRISPR/Cas9 en dos líneas celulares de CV humano. Sobre estas células se expresó una forma wt o mutante (catalíticamente inactiva) del gen delecionado correspondiente. Las líneas celulares modificadas (y las correspondientes parentales) se usaron para su caracterización mediante RNA-seq y ATAC-seq. Hemos determinado que los moduladores epigenéticos G9a y EZH2 ejercen diferentes funciones en la biología celular del CV. G9a modula la expresión de genes relacionados con la inmunidad, mientras que EZH2 modula la expresión de genes de proliferación/diferenciación. En conclusión, el desarrollo de diferentes modelos de ratón, su uso como herramientas preclínicas para la evaluación de nuevos enfoques terapéuticos y los estudios de efectores epigenéticos en líneas celulares de CV han proporcionado importantes datos para descifrar vías moleculares involucradas en la biología de esta enfermedad y su manejo terapéutico.
Las futuras líneas de investigación derivadas de esta tesis estarán dirigidas a los siguientes estudios: desarrollo y caracterización de modelos ortotópicos de ratón para el estudio del cáncer de vejiga; validación del estudio preclínico de Palbociclib en combinación con Avelumab y su posible uso en la clínica; estudios en profundidad sobre el papel de G9a y EZH2 en cáncer de vejiga y su potencial como dianas terapéuticas para el tratamiento de esta enfermedad.
El pasado 21 de julio de 2022, Ester Munera Maravilla, investigadora de la Unidad de Innovación Biomédica del CIEMAT, defendió su trabajo de tesis doctoral titulado: "Understanding bladder cancer through mouse models and epigenetic targets". Este trabajo de investigación ha sido realizado en el CIEMAT bajo la dirección de los doctores Jesús M. Paramio González y Cristian Suárez Cabrera, ambos investigadores del mismo centro. Su defensa tuvo lugar en la Facultad de Medicina de la Universidad Autónoma de Madrid obteniendo la calificación de sobresaliente "Cum laude".
Ester Munera Maravilla se incorporó en abril de 2017 a la Unidad de Oncología Molecular del Departamento de Investigación Básica del CIEMAT (actualmente Unidad de Innovación Biomédica) como contratada predoctoral, desarrollando su tesis en el marco del proyecto: "Understanding Bladder Cancer through genetically engineered mouse models of preclinical application" (SAF2015-66015-R).
El cáncer de vejiga (CV) ha sido reconocido como una enfermedad clínica y molecularmente heterogénea, con diferentes alteraciones genómicas y epigenéticas descritas y que plantean la cuestión de cuál es la relevancia de estos genes en la tumorigénesis. A lo largo del periodo de investigación de esta tesis, se han desarrollado diferentes modelos in vitro e in vivo que han sido utilizados para estudiar la biología de la vejiga y tienen potencial para mejorar nuestra comprensión de la progresión del CV, así como su diagnóstico y tratamiento. En esta tesis doctoral se han desarrollado y caracterizado cuatro modelos de ratón genéticamente modificados de CV músculo invasivo (CVMI) generados por la pérdida de dos (Pten; Trp53, DKO) o cuatro (Pten; Trp53; Rb1; Rbl1, QKO) genes supresores tumorales mediante adenovirus que expresan la recombinasa Cre en tipos celulares concretos (células basales o luminales del urotelio) mediante el empleo de promotores específicos. Los análisis moleculares y transcriptómicos de los tumores desarrollados a partir de estos modelos han revelado importantes similitudes con el subtipo sarcomatoide del CV humano, y ciertas diferencias entre los modelos estudiados proporcionándonos un marco útil para estudios posteriores.
Además, se han ampliado los métodos para desarrollar cultivos celulares de ratón de CVMI trasplantables, que han permitido generar modelos subcutáneos singénicos de ratón. Los tumores generados mediante inoculación subcutánea de estos cultivos celulares en ratones singénicos mostraron la conservación de las características de los tumores primarios parentales, proporcionándonos una herramienta útil para estudios preclínicos. Haciendo uso de los mismos, se realizó un análisis de la respuesta a la inhibición de CDK4/6 (Palbociclib) solo o en combinación con un anti-PD-L1 (Avelumab), y relacionando dicha respuesta con diferentes condiciones patológicas (expresión de citoquinas, reclutamiento de células inmunes, etc.). Los datos obtenidos confirman, de acuerdo con resultados previos del grupo de investigación, que el inhibidor de CDK4/6 es activo en todos los modelos, independientemente de sus características genéticas, aunque los mecanismos de acción del inhibidor parecen ser diferentes. También se observó cooperación entre Palbociclib